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慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞及肝组织中HBV cccDNA定量检测
作者:mow    医生频道来源:医学新闻    点击数:    更新时间:2007-8-23

  优化HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)特异性定量检测方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。

  慢性乙型肝炎是指乙肝病程超过6个月,或有表面抗原携带史者再次出现肝炎症状、体症或肝功能异常。

  中华传染病杂志一月第一期刊登一项研究,研究者采用标本抽提核酸后,以不降解质粒的ATP依赖的DNA酶(PSAD)进行酶切,再以跨双缺口的特异性引物进行荧光PCR定量检测HBV cccDNA;用10份HBV高滴度(10^7拷贝/mL)血清和梯度稀释的HBV克隆质粒标准品,验证此检测方法的特异度和灵敏度;取慢性乙型肝炎患者PBMC和肝组织穿刺标本各50份,检测其总HBVDNA和cccDNA。

  第二军医大学附属长征医院感染科郝勇等研究人员研究显示10份血清标本均无假阳性cccDNA检测结果,灵敏度可达到103拷贝/mL。所有PBMC中cccDNA检测均阴性;所有肝组织中总HBVDNA和cccDNA检测均阳性,总HBVDNA含量为3.19×10^3~6.69×10^7拷贝/μg人基因组DNA,cccDNA含量为7.32×10^0~6.51×10^6拷贝/μg人基因组DNA,同一患者肝组织中总HBVDNA含量是cccDNA含量的10.7倍至9.2×10^5倍。

  因此可见本方法特异度和灵敏度高。PBMC不能支持HBV的复制。在慢性乙型肝炎患者的肝组织中均可检测到cccDNA,但其水平并非与细胞内总HBV DNA水平正相关。 

  (中华传染病杂志2007年25卷1期38-42)

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